Generation of Nurr1 expressing human embyonic carcinoma cell line
Nurr1을 발현하는 사람 배아종양세포주의 확립
- 주제(키워드) Dopaminergic neuron , Nurr1 , TH , NT2 , RA , 파킨슨씨병 , 사람 배아종양세포 , 레티노산 , 타이로신 인수산화효소
- 발행기관 아주대학교 대학원
- 지도교수 김승엽
- 발행년도 2005
- 학위수여년월 2005. 2
- 학위명 석사
- 학과 및 전공 일반대학원 학과간협동과정
- 본문언어 영어
초록/요약
Parkinson's disease is caused by selective degeneration of midbrain dopaminergic (DA) neurons, but its pathological mechanism is unknown. Nurr1 is a member of nuclear receptor super family of transcriptional factor that is DA neurons. Nurr1 is essential for the development, differentiation and survival of midbrain DA neurons, because expression of tyrosine hydroxylase (TH), the-rate limiting enzyme dopamine synthesis, requires Nurr1. Previous studies have shown is demonstration that in Nurr1-null mutant mice selective agenesis of midbrain DA neurons. In the present study, we have generated a subline of Ntera-2 (NT2), a human embryonic carcinoma cell line, carrying human Nurr1 gene. This cell line, NT2.Nurr1, expresses Nurr1 specific mRNA and Protein as determined by RT-PCR and western blotting analyses. Following treatment with retinoic acid (RA) for 4-5 weeks, approximately 20 % of NT2.Nurr1 cells differentiated into neurons. When RA 4 weeks treatment into NT2.Nurr1 cell is sown a little higher level TH than NT2 cells. Then following treated with Shh 1 week, NT2.Nurr1 cells shown TH level dramatically increased (about 3 folds). Our results suggest that NT2.Nurr1 cells cans serve as source of cell replacement Parkinson's disease.
more초록/요약
도파민은 뇌기능, 운동조절, 인지기능, 감정등에 영향을 끼치는 중요한 신경전달물질중의 하나이다. 도파민은 중뇌 흑색질에 있는 도파민성 신경세포에서 분비되어지며, 이 세포의 사멸은 파킨슨씨 병을 야기시킨다. 최근 10년간 연구에서 파킨슨씨 병의 치료를 위한 세포이식기술은 눈부신 발전을 이루어왔다. 실험실에서 신경줄기세포를 도파민성 신경세포로 분화시킴으로써 이 병에 대한 치료목적으로 많은 연구가 수행되어 왔다. 이 연구에서는 레티노산을 처리하면 신경세포로 분화할수 있는 능력을 가진 사람 배아 종양세포인 NT2에 도파민성 신경세포의 신생과 생존에 필수적인 Nurr1 유전자를 도입하였다. 도입된 유전자는 역전사 중합효소 반응과 단백질 항원항체반응을 통하여 확인 하였다. 이렇게 만들어진 NT2.Nurr1 세포주에 비타민 A의 전구체인 레티노 산을 이용하여 4주일 동안 처리함으로써 신경세포로의 분화를 촉진하였다. 신경세포로의 분화의 확인은 이에 대한 표지자를 이용하여 역전사 중합효소 합성반응과 단백질면역반응을 통하여 확인하였다. 도파민성 신경세포의 표현형또한 타이로신 인수산화효소에 대한 메신저 RNA와 단백질에 대한 면역반응을 통하여 이를 확인하였다. 그러나 이 효소에 대 대한 반응은 비교군과 대조군이 확실한 차이을 보이지 않았다. 따라서 신경세포에 Shh을 처리 하여 보다 높은 수준의 타이로신 인수산화효소의 발현을 촉진하였다. 이 효소에 대한 단백질은 항원항체 검출법을 통해 확인하였다. 이렇게 분화된 세포는 도파민 분비와 생체내에서 검증을 통하여 도파민성 신경세포의 기능을 확인하고, 궁극적으로 파킨슨씨 병에 해 효과적인 치료목적으로 쓰일 것이라 기대된다.
more목차
TABLE OF CONTENTS
ABSTRACT = 5
TABLE OF CONTENTS = 7
LIST OF FIGURES = 8
LIST OF TABLES = 9
Ⅰ. INTRODUCTION = 10
Ⅱ. Materials and Methods = 13
1. NT2 cell cultures and transfection with Nurr1 = 13
2. Differentiation of NT2.Nurr1 = 13
4. Reverse transcription-PCR (RT-PCR) analysis = 14
5. Western blot analysis = 15
6. Immunocytochemistry = 16
Ⅲ. RESULTS = 17
1. Expression of Nurr1 in NT2.Nurr1 cells = 17
2. Dopaminergic differentiation of NT2 and NT2.Nurr1 cells by RA treatment = 17
3. Effect of Shh on TH expression in differentiated NT2 and NT2.Nurr1 cells = 18
Ⅳ. DISCUSSION = 20
REFERENCES = 22
국문요약 = 27
