사구체질환에서 Anti-nephrin 자가항체 유무에 따른 소변 족세포 특이 전사체 양상
Urinary Podocyte-Specific Transcript Patterns According to Anti-nephrin Antibody Status in Glomerular Diseases
- 주제(키워드) anti-nephrin 자가항체 , 족세포 , 소변 mRNA , 미세변화신증후군 , 국소분절사구체경화증 , IgA 신증 , 비침습적 생체표지자
- 주제(DDC) 570
- 발행기관 아주대학교 일반대학원
- 지도교수 박선
- 발행년도 2026
- 학위수여년월 2026. 8
- 학위명 석사
- 학과 및 전공 일반대학원 의생명과학과
- 실제URI http://www.dcollection.net/handler/ajou/000000036688
- 본문언어 한국어
- 저작권 아주대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.
초록/요약
사구체질환에서 Anti-nephrin 자가항체 유무에 따른 소변 족세포 특이 전사체 양상 사구체 질환에서 족세포 손상은 단백뇨 발생과 질환 진행에 중요한 역할을 한다. Nephrin, podocin, synaptopodin 은 각각 세극막 구조의 유지, 세극막 복합체의 안정화, actin 세포골격 및 발돌기 구조 유지에 관여하는 대표적인 족세포 관련 분자이다. 최근 anti-nephrin 자가항체가 미세변화신증후군（minimal change disease, MCD）을 포함한 일부 podocytopathy 에서 보고되면서, 혈청 자가항체와 족세포 손상 지표 사이의 연관성에 대한 관심이 높아지고 있다. 그러나 성인 사구체 질환 코호트에서 anti-nephrin 자가항체 유무와 소변 내 podocyte-specific mRNA 발현을 함께 비교한 연구는 드물다. 본 연구에서는 한국인 정상 대조군과 MCD, 국소분절사구체경화증（focal segmental glomerulosclerosis, FSGS）, IgA 신증（IgA nephropathy, IgAN）, 당뇨병성 신증（diabetic nephropathy, DN） 환자를 대상으로 혈청 anti-nephrin 자가항체를 면역침강-웨스턴 블롯（immunoprecipitation-western blot, IP-WB）으로 검출하였다. 또한 소변 침사에서 추출한 RNA 를 이용하여 nephrin, podocin, synaptopodin mRNA 를 정량적 중합효소연쇄반응（quantitative polymerase chain reaction, qPCR）로 분석하였고, 발현량은 β-actin 으로 보정하였다. 분석 결과, anti-nephrin 자가항체 양성률은 MCD에서 80.0%로 가장 높았고, FSGS 7.5%, IgAN 27.3%, DN 10.5%로 확인되었으며 정상 대조군에서는 검출되지 않았다. IgAN 에서는 anti-nephrin 자가항체 양성률이 상대적으로 높게 관찰되어 Oxford MEST-C 지표를 기준으로 추가 분석을 시행하였고, 양성군에서 M0 및 T0/C0 병변이 상대적으로 많이 관찰되었으나 표본 수가 제한적이므로 예비적 소견으로 해석하였다. 소변 mRNA 분석에서는 anti-nephrin 자가항체와 urinary podocyte transcript 의 연관 양상이 질환별로 다르게 나타났다. 특히 FSGS 에서는 anti-nephrin 자가항체 양성군에서 nephrin, podocin, synaptopodin mRNA가 모두 음성군보다 낮게 관찰되었다. 반면 MCD, IgAN, DN 에서는 동일한 감소 양상이 일관되게 확인되지 않았다. 또한 synaptopodin mRNA 감소는 여러 질환군에서 관찰되었으나, 그 질환 특이적 의미는 명확하지 않았다. 결론적으로, 본 연구는 한국인 성인 사구체 질환 코호트에서 anti-nephrin 자가항체와 urinary podocyte transcript 의 연관 양상이 질환별로 동일하지 않음을 보여주었다. 특히 FSGS 에서는 anti-nephrin 자가항체 양성군에서 세 가지 podocyte- related mRNA 가 함께 감소하는 양상이 관찰되었다. 이러한 결과는 anti-nephrin 자가항체의 의미가 질환 맥락에 따라 다르게 해석될 필요가 있음을 시사한다. 다만 본 연구는 표본 수가 제한된 단면 연구이므로, 본 결과는 탐색적 관찰로 이해되어야 하며 향후 독립 코호트와 종적 연구를 통한 검증이 필요하다.
more초록/요약
Podocyte injury plays an important role in the development of proteinuria and the progression of glomerular diseases. Nephrin, podocin, and synaptopodin are key podocyte-associated molecules responsible for maintaining the slit diaphragm structure, stabilizing the slit diaphragm complex, and preserving the actin cytoskeleton and foot processes, respectively. Recent reports have identified anti-nephrin autoantibodies in several podocytopathies, including minimal change disease （MCD）, leading to increasing interest in the association between circulating autoantibodies and markers of podocyte injury. Nevertheless, studies simultaneously investigating anti-nephrin autoantibodies and urinary podocyte-specific mRNA expression in adult glomerular disease cohorts remain scarce. This study detected serum anti-nephrin autoantibodies using immunoprecipitation-western blot （IP-WB） in a Korean cohort consisting of healthy controls and patients with MCD, focal segmental glomerulosclerosis （FSGS）, IgA nephropathy （IgAN）, or diabetic nephropathy （DN）. RNA extracted from urinary sediments was analyzed for nephrin, podocin, and synaptopodin mRNA levels via quantitative polymerase chain reaction （qPCR）, which were then normalized to β-actin. Anti-nephrin autoantibody positivity was highest in MCD （80.0%）, followed by IgAN （27.3%）, DN （10.5%）, and FSGS （7.5%）, with no detection in healthy controls. Due to the relatively high positivity rate in IgAN, further evaluation based on the Oxford MEST-C criteria was conducted. While M0 and T0/C0 lesions were more frequently observed in the autoantibody-positive group, these findings should be considered preliminary given the limited sample size. In the urinary mRNA analysis, the relationship between anti-nephrin autoantibodies and urinary podocyte transcripts varied depending on the disease. In particular, in FSGS, the levels of nephrin, podocin, and synaptopodin mRNA were consistently lower in the autoantibody-positive group than in the negative group. This concordant decrease was not evident in MCD, IgAN, or DN. While a decrease in synaptopodin mRNA was noted across several disease groups, its disease-specific significance remained unclear. In conclusion, this study demonstrated that the association between anti-nephrin autoantibodies and urinary podocyte transcripts differs across disease types within a Korean adult glomerular disease cohort. The concurrent decrease of all three podocyte-related mRNAs in autoantibody-positive FSGS patients suggests that the clinical significance of these autoantibodies may differ according to disease context. Because this was a cross-sectional study with a restricted sample size, the findings should be considered exploratory and require validation in independent and longitudinal cohorts.
more목차
Ⅰ. 서론 1
A. 사구체 여과 장벽과 족세포의 생물학적 중요성 및 분자적 특성 1
B. 본 연구에서 분석하는 사구체 질환의 병인기전과 anti-nephrin 자가항체 양성 빈도 2
C. anti-nephrin 자가항체의 병인적 역할과 검출 방법의 비교 3
D. 족세포뇨(Podocyturia)와 anti-nephrin 자가항체의 상관성 5
E. 본 연구 목적 6
Ⅱ. 재료 및 방법 7
A. 연구 참여자의 혈청과 소변 시료 7
B. 면역침강-웨스턴 블롯(Immunoprecipitation-Western Blot, IP-WB) 7
(1) Protein G agarose 기반 항원-항체 복합체 침강 7
(2) Ni-NTA resin 기반 항원-항체 복합체 침강 8
(3) 웨스턴 블롯 분석(Western Blotting) 8
C. 정량적 중합효소연쇄반응(qPCR) 9
(1) RNA 및 cDNA 합성 9
(2) Primer 설계 및 유전자 정보 9
(3) qPCR 반응 조건 10
(4) 데이터 분석 10
D. 통계 분석 11
Ⅲ. 결과 12
A. 연구참여자의 특성 분석 12
B. 면역침강-웨스턴 블롯(IP-WB)을 이용한 anti-nephrin 자가항체 검출 14
C. IgAN에서 자가항체 유무와 MEST-C 병리 조직 지표의 연관성 18
D. anti-nephrin 자가항체 유무에 따른 주요 임상 지표 비교 20
E. anti-nephrin 자가항체 유무에 따른 소변 내 족세포 mRNA 발현량 분석 24
F. IgAN에서 치료제 사용 유무에 따른 소변 족세포 mRNA 양의 차이 분석 26
G. FSGS 환자에서 anti-nephrin 자가항체 양성 여부에 따른 임상 지표-mRNA 상관관계 28
Ⅳ. 고찰 31
V. 결론 34
VI. 참고문헌 35
Abstract 38
