검색 상세

Role of TINAGL1 derived from cancer-associated fibroblast on progression of diffuse-type gastric cancers

  • 이다경 (아주대학교 일반대학원)

초록/요약

미만형 위암의 종양세포는 단일 세포나 작은 하위 그룹의 형태로 기질에 침투하는 특징이 있기 때문에 기질이 미만형 위암의 진행에 큰 영향을 미친다. 암 관련 섬유모세포는 종양 기질의 주요 구성요소이다. 본 연구에서, 우리는 암 관련 섬유모세포 특이적인 분비 분자를 식별하고 미만형 위암에서 암 관련 섬유모세포에 의해 유도되는 암 진행의 메커니즘을 조사하였다. 미만형 위암 환자의 종양 및 정상 위 조직에서 유래한 정상 섬유모세포와 암섬유모세포의 쌍으로 전사체 분석, 섬유모세포들의 배양액으로 단백체 분석을 시행하였다. 암 관련 섬유모세포는 정상 섬유모세포 보다 높은 TINAGL1 발현을 나타낸다. 암섬유모세포와의 공동 배양은 미만형 위암 세포의 이동성을 증가킨다. 게다가, 암섬유모세포는 미만형 위암 세포의 FAK 인산화나 중배엽 표지자의 발현을 증가시킨다. 미만형 위암과 암섬유모세포를 함께 이식한 이종이식 종양 모델에서 림프절 전이가 증가하는 등 공격적인 표현형을 보였다. 암섬유모세포의 TINAGL1 억제나 FAK 억제제의 사용은 미만형 위암 세포의 FAK 인산화나 이동능력을 감소시켰다. 다음으로 미만형 위암 환자의 정상 및 위암 냉동 조직에서는 단백질, 파라핀에 고정된 조직에서는 전령 RNA의 발현을 평가했다. 미만형 위암 환자의 암 조직에서는 짝 지어진 정상 조직보다 TINAGL1이 더 높게 발현하고 TINAGL1은 COL1A1과 같은 부위에서 검출되었다. 게다가 높은 TINAGL1 발현은 여러 공공 데이터와 자체 환자 군 모두에서 나쁜 예후와 유의한 상관관계를 나타낸다. 이러한 결과는 암섬유모세포의 TINAGL1이 미만형 위암을 위한 새로운 치료적 전략이 될 수 있다는 점을 나타낸다.

more

초록/요약

Tumor cells of diffuse-type gastric cancer (DGC) are discohesive and infiltrate into the stroma as single cells or small subgroups, so the stroma significantly impacts DGC progression. Cancer-associated fibroblasts (CAFs) are major components of the tumor stroma. Here, we identified CAF-specific secreted molecules and investigated the mechanism underlying CAF-induced DGC progression. We conducted transcriptome analysis for paired normal fibroblast (NF)-CAF isolated from DGC patient tissues and proteomic analysis of fibroblast conditioned media. CAFs highly expressed tubulointerstitial nephritis antigen like 1 (TINAGL1) compared to NFs. The co-culture of CAFs increased the migration of DGC. Moreover, CAFs enhanced the phosphorylation of focal adhesion kinase (FAK) and the expression of mesenchymal markers in DGC cells. Animal studies revealed that DGC tumors coinjected with CAFs exhibited aggressive phenotypes, including lymph node metastasis. Blocking TINAGL1 in CAFs or treatment with FAK inhibitors reduced phosphorylation of FAK and migration in DGC cells. We evaluated the expression of TINAGL1 protein in frozen tissues and mRNA in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues from DGC patients and paired normal stomachs. In DGC patients’ tissues, TINAGL1 expression was higher in cancer tissues than in paired normal tissues and was colocalized with COL1A1. Furthermore, high TINAGL1 expression was significantly correlated with poor prognosis in several public datasets and our DGC patient cohort. These results indicate that TINAGL1 in CAFs may be a novel therapeutic target for DGC.

more

목차

I. INTRODUCTION 1
II MATERIALS AND METHODS 4
1. Cell culture 4
2. Preparation of conditioned media (CM) 4
3. Co-culture and treatment 4
4. Transwell migration assay 5
5. Soft agar assay 5
6. Cell proliferation assay 6
7. Transcriptome analysis 6
8. Proteomic analysis 6
9. RNA isolation and reverse transcriptase PCR (RT-PCR) 7
10. Quantitative reverse transcriptase PCR (qRT-PCR) 7
11. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) 8
12. Western blotting 8
13. Immunoprecipitation (IP) 9
14. Immunohistochemistry (ICC) 10
15. Phospho explorer antibody array 10
16. Small interfering RNA (siRNA) 11
17. Cell immortalization 12
18. Short hairpin RNA (shRNA) 12
19. Dual RNA-in situ hybridization (RNA-ISH) 12
20. Immunohistochemistry (IHC) 13
21. Public data 13
22. Animal model study 13
23. Statistical analysis 14
III. RESULTS 15
1. Integrated analysis for transcriptome and proteomics reveals that TINAGL1 is the specific molecule produced by CAFs 15
2. CAF-secreted TINAGL1 can interact with the integrin and activate FAK signaling pathway in DGC cells 24
3. TINAGL1-high CAFs can more contribute to the aggressiveness of DGC cells compared with NFs 33
4. Inhibition of the TINAGL1/integrin/FAK axis can alleviate CAF-induced aggressiveness of DGC cells 44
5. Stromal TINAGL1 expression is significantly correlated with the oncologic outcome of human DGC 52
IV. DISCUSSION 63
V. REFERENCES 69
국문요약 76

more
반출 Meta View 목록