사람 T 세포주에서 종양세포 배양액에 의한 TIM-3 발현 증가
Promotion of TIM-3 Expression in a Human T Cell line by Tumor-Conditioned Media
- 주제(키워드) TIM-3 , tumor microenvironment , cAMP , PKA , Epac , PGE2
- 발행기관 아주대학교
- 지도교수 박선
- 발행년도 2017
- 학위수여년월 2017. 2
- 학위명 박사
- 학과 및 전공 일반대학원 의생명과학과
- 실제URI http://www.dcollection.net/handler/ajou/000000024675
- 본문언어 영어
- 저작권 아주대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.
초록/요약
T cell immunoglobulin- and mucin-domain-containing molecule-3 (TIM-3) is well known as one of the immune check point molecules. TIM-3 expressed on Th1 cells negatively regulates Th1 cell functions. TIM-3 expression is induced on exhausted T cells and senescent T cells in various diseases including autoimmune diseases, inflammatory diseases and cancers. However, the regulatory mechanism of TIM-3 expression in immune disorders has not been explored. Therefore, I wanted to investigate the regulatory mechanism of TIM-3 expression in a human T cell line cultured in the condition mimicking tumor microenvironment. TIM-3 mRNA and protein levels were promoted in Jurkat T cells cultured in tumor cell conditioned media (CM) or stimulated with agent elevating intracellular cyclic adenosine monophosphate (cAMP) concentration. Activation of protein kinase A (PKA) and exchange protein directly activated by cAMP (Epac), molecules involved in cAMP downstream pathway, also increased TIM-3 expression in Jurkat T cells. Especially, inhibition of PKA pathway attenuated tumor CM-induced TIM-3 expression as well as cAMP-induced TIM-3 expression. Prostaglandin E2 (PGE2) which elevates intracellular cAMP levels, increased in tumor CM and slightly up-regulated TIM-3 expression in Jurkat T cells, however, tumor CM- induced TIM-3 expression was not affected by treatment with antagonist to PGE2 receptors. On the other hand, cAMP responsiveness of TIM-3 minimal promoter was shown. Collectively, this study demonstrates that TIM-3 expression is enhanced by incubation of Jurkat T cells in tumor CM or activation of cAMP/PKA/Epac pathway. These results provide insights to the regulation of TIM-3 expression in tumor and these insights could serve as the foundation for developing an approach for regulation of TIM-3 expression.
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ABSTRACT •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• ⅰ
TABLE OF CONTENTS •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• ⅲ
LIST OF FIGURES ••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• ⅴ
Ⅰ. INTRODUCTION •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 1
A. TIM-3 •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 1
B. Cyclic adenosine monophosphate (cAMP) signaling ••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 5
C. Prostaglandin E2 (PGE2) •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 8
D. Purposes of this research •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 11
Ⅱ. MATERIALS AND METHODS ••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 12
A. Cell culture chemical treatment •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 12
B. SDS-PAGE and Western blotting ••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 13
C. RNA isolation and cDNA synthesis •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 13
D. Real-time RT-PCR •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 14
E. PGE2 measurement ••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 14
F. Plasmid construction and luciferase reporter assay ••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 15
G. siRNA transfection ••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 16
H. Statistical analysis ••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 16
Ⅲ. RESULTS •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 17
Ⅳ. DISCUSSION ••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 39
Ⅴ. CONCLUSION •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 47
REFERENCES •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 48
국문요약 ••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 64
