CTCF의 유전체 안정성 유지 기능 연구
- 주제(키워드) CTCF , DDR , HR
- 발행기관 아주대학교
- 지도교수 이종수
- 발행년도 2016
- 학위수여년월 2016. 8
- 학위명 석사
- 학과 및 전공 일반대학원 생명과학과
- 실제URI http://www.dcollection.net/handler/ajou/000000022770
- 본문언어 한국어
- 저작권 아주대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.
초록/요약
세포는 유전체 안정성을 유지하기 위해 세포 내외적인 DNA 손상 유발원으로부터 대응하는 DNA 손상 반응 경로를 지니고 있다. DNA 결손 중, 이중나선 끊어짐 (Double Strand Break, DSB)은 상동 재조합 (Homologous Recombination, HR) 및 비 상동 말단 재조합 (Non-Homologous End Joining, NHEJ) 경로에 의해 수선된다. 전사 억제자인 CTCF는 cohesion 복합체와 상호작용한다고 보고 되어있으며, 이는 HR 수선 경로에 관여한다고 알려져 있으나 CTCF의 DDR 관련 기능은 잘 밝혀져 있지 않다. 본 연구에서는 CTCF가 DDR에 관여하는지 그리고 어떻게 관여하는지 연구하였다. CTCF가 결핍된 세포에서 DNA 손상 표지자인 γH2AX foci가 세포 외적인 DNA 손상 인자 없이 형성되었으며 이는 CTCF가 유전체 안정성에 필요함을 의미한다. 더욱이 CTCF는 DNA 손상 지역에 소집되며 HR 수선에도 필요하다. 또한 CTCF의 DNA 손상 지역으로의 소집은 DNA 손상 신호 전달 인산화 효소인 ATM 결손 세포와 CHK2 억제자 처리 세포에서 영향을 받는다. 이는 ATM-CHK2 경로가 CTCF로 DNA 손상 신호를 전달함을 시사한다. 종합적으로 이러한 발견은 CTCF의 유전체 안정성과 관련된 새로운 기능을 제시한다.
more목차
I. 서 론 1
II. 재료 및 방법 4
1. Cell culture 4
2. Plasmid & Transfection 4
3. Immunofluorescence 5
4. Chromatin immunoprecipitation 6
5. Laser microirradiation 7
6. DSB repair assay and FACS 8
7. Immunoblotting 8
8. Knockdown efficiency analysis 9
III. 결 과 11
1. CTCF Knockdown cell에서 γH2AX foci가 형성된다 11
2. DNA damage site로 CTCF가 소집된다 11
3. CTCF는 ATM-CHK2 kinase에 의해 damage site로 소집된다 13
4. CTCF의 knockdown이 HR activity를 감소시킨다 15
IV. 결론 및 고찰 26
V. 참 고 문 헌 29
Abstract 33
