Clostridium butyricum 유래 이종 유전자를 발현하는 형질전환 Escherichia coli 에서의 1,3-propanediol 생산
Production of 1,3-propanediol by transformed Escherichia coli
- 주제(키워드) Clostridium butyricum , Escherichia coli , glycerol , 1 , 3-propanediol
- 발행기관 아주대학교
- 지도교수 유연우
- 발행년도 2013
- 학위수여년월 2013. 2
- 학위명 석사
- 학과 및 전공 일반대학원 분자과학기술학과
- 실제URI http://www.dcollection.net/handler/ajou/000000014263
- 본문언어 한국어
- 저작권 아주대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.
초록/요약
석유자원의 고갈에 대비한 바이오 디젤의 생산이 가속화됨에 따라 바이오 디젤 생산의 부산물인 glycerol이 상당히 많이 발생하고 있다. 때문에 본 연구는 바이오 디젤 생산으로 발생하는 glycerol을 이용하여 다양한 용도로 사용되는 화학물질인 1,3-propanediol을 생산하는 Escherichia coli 균주의 개발을 목적으로 하였다. 1,3-Propanediol을 생산하는 E. coli 균주 개발은 자연적인 1,3-propanediol 생산 균주들이 가지는 병원안전성 문제와 독성물질 및 glycerol 대사 부산물 문제를 해소함으로써 공정설비를 간소화 할 수 있는 장점을 가지고 있다. 개발된 1,3-propanediol 생산 E. coli는 형질도입된 재조합 plasmid를 통해 Clostridium butyricum 유래의 glycerol dehydratase (GDHt)와 E. coli 유래의 1,3-propanediol dehydrogenase (1,3-PD DH)를 발현하는 균주로서, 이 효소들을 이용하여 glycerol로부터 1,3-propanediol을 생산한다. 또한 효소활성에 대한 coenzyme으로 vitamin B12를 필요로 하지 않는 vitamin B12 independent GDHt를 이용하므로 1,3-propanediol 생산 시 고가의 vitamin B12를 첨가할 필요가 없어 경제적인 공정 설계가 가능하다.
more초록/요약
1,3-Propanediol (1,3-PD) production by fermentation of glycerol was first described in 1881 but little attention was paid to this biosynthesis for over a century. 1,3-PD is an industrially valuable chemical intermediate with potential uses in the production of polymers (polyesters, polyethers, polyurethanes), cosmetics, foods, lubricants, medicines and as an intermediate for the synthesis of heterocyclic compounds such as indole and quinolines. Growing price of crude oil and fuels for transportation sectors have resulted in a rapid growth in biodiesel production worldwide. An increase of biodiesel production leads thus to an increase of the quantity of the primary co-product, glycerol. Since the existing glycerol supply and demand market is tight, the recent increase in glycerol production from biodiesel refining has created a glut in the glycerol market. It is estimated that the world biodiesel market will achieve the quantity of 37 billion gallons by 2016, which means that significantly more than four billion gallons of crude glycerol will be produced every year. The high growth rate of biofuel market and the perspective of glycerol becoming abundant attract even more attention to this valuable chemical. I studied about strain improvement and optimization of culture condition for 1,3-PD production by Escherichia coli. In this study, I constructed pQE30 – B12rY using dhaB gene from Clostridium butyricum KCTC3700 and yqhD gene from Escherichia coli JM109. As a result, I could achieve 2.5 g/L 1,3-PD from recombinant Escherichia coli B12rY for 12 hours.
more목차
List of Tables
List of Figures
국문요약
I. 서론
1. 1,3-Propanediol의 중요성
2. 1,3-Propanediol의 생물학적 생산
3. 1,3-Propanediol의 생산에 관여하는 효소
4. 연구의 목적
II. 재료 및 방법
1. 실험 재료
1.1. 균주
1.2. 배지 및 배양 조건
1.3. 플라스미드 벡터
2. 실험 방법
2.1 Clostridium butyricum KCTC 3700에서의 genomic DNA 분리
2.2. PCR을 통한 dhaB 및 yqhD 유전자의 증폭
2.3. DNA plasmid vector의 증폭 및 분리
2.4. 재조합 DNA plasmid의 구축
2.5. E. coli의 형질전환 및 선별
2.6. pQE30 – B12Y plasmid의 구축 및 E. coli B12Y 제조
2.7. B12Y에서의 단백질 발현 확인
2.8. B12Y에서의 1,3-propanediol 생산 확인
2.9. pQE30 – B12rY plasmid의 구축 및 E. coli B12rY 제조
2.10. B12rY에서의 단백질 발현 확인 및 B12Y와의 발현 비교
2.11. B12Y와 B12rY에서의 1,3-propanediol 생산 비교
2.12. B12rY의 1,3-propanediol 생산에 대한 최적 조건 선택
2.13. B12rY의 1,3-propanediol 생산에 대한 최적 배지 선택
III. 결과 및 고찰
1. dhaB 및 yqhD 유전자를 도입한 재조합 plasmid 구축
1.1. Clostridium butyricum KCTC3700에서의 genomic DNA 분리
1.2. PCR을 통한 dhaB 및 yqhD 유전자의 증폭
1.3. 재조합 plasmid 구축 및 형질전환 E. coli 제조
2. E. coli B12Y에서의 유전자 발현 및 1,3-propanediol 생산
2.1. B12Y에서의 유전자 발현
2.2. B12Y에서의 1,3-propanediol 생산
3. E. coli B12rY의 유전자 발현 및 1,3-propanediol 생산 비교
3.1. B12rY에서의 유전자 발현 비교
3.2. B12rY에서의 1,3-propanediol 생산 비교
4. E. coli B12rY에서의 1,3-propanediol 생산 조건 최적화
4.1. 1,3-propanediol 생산에 대한 호기적 또는 혐기적 조건 선택
4.2. 1,3-propanediol 생산에 대한 pH 조건 선택
4.3. 1,3-propanediol 생산에 대한 최적 배지 선택
IV. 결론
V. 참고문헌
Abstract
Appendix
