T 세포에서 활성 자극에 의한 TIM-3 promoer CpG와 히스톤 H3 메틸화의 변화
Methylation Change of Histone H3 and CpG Sites at the TIM-3 Gene Promoter in Response to Stimulation
- 주제(키워드) TIM-3 , histone H3 methylation , CpG DNA methylation
- 발행기관 아주대학교
- 지도교수 박선
- 발행년도 2011
- 학위수여년월 2011. 8
- 학위명 석사
- 학과 및 전공 일반대학원 의생명과학과
- 실제URI http://www.dcollection.net/handler/ajou/000000011918
- 본문언어 한국어
- 저작권 아주대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.
초록/요약
T cell immunoglobulin and mucin protein-3 (TIM-3)는 면역 반응을 조절하는 분자로써 CD11b+ 세포에서 항상 발현하지만 CD4+ T 세포에서는 자극에 의해 활성화 되었을 때 발현한다고 알려져 있다. 본 연구에서는 epigenetic 조절에 따른 TIM-3 전사 조절을 이해하기 위하여 T 세포를 사용하여 TIM-3 promoter에서의 epigenetic 변형을 분석하였다. 먼저 DNA methyltransferase inhibitor인 5-Azacytidine을 Jurkat T 세포에 처리하였을 때 TIM-3 발현이 증가하였다. 또한 TIM-3 promoter (-1500 ~ -1)에 CpG methyltransferase인 SssI로 메틸화 시켰을 때 promoter 활성이 감소하였다. Pyrosequencing assay를 사용하여 TIM-3 유전자 DNA CpG 메틸화 정도를 측정하였을 때 TIM-3 유전자 -1240 ~ + 31 (-242, -259 제외)의 CpG 메틸화가 상대적으로 낮게 관찰되었다. 또한 TIM-3 promoter -242와 -259의 CpG 메틸화 정도가 TIM-3의 발현에 차이가 있는 세포마다 다르게 관찰되었다. 그러나 phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)와 ionomycin (A23187) 자극에 의한 T 세포 활성화에 따른 DNA 메틸화 변화는 일어나지 않았다. 다음으로 TIM-3 promoter에서의 히스톤 H3 메틸화는 PBA와 A23187 자극에 의한 T 세포를 활성화 시켰을 때 proximal TIM-3 promoter (-954 ~ -34) 부위에서 H3K4me2의 수준이 증가되었고 distal TIM-3 promoter (-1549 ~ -1048) 부위에서 H3K9me3와 H3K27me3의 수준이 증가되었다. 본 연구의 결과는 TIM-3 전사 조절을 이해하는데 중요한 기초로 제공될 것이다.
more목차
Ⅰ. 서론 1
Ⅱ. 재료 및 방법 6
A. 세포배양 6
B. CD4+ 세포와 CD11b+ 세포의 분리 6
C. T 세포 활성 유도와 5-Azacytidine 처리 7
D. RNA 추출과 cDNA 합성 7
E. Real-time reverse transcriptase (RT)-PCR 8
F. DNA 메틸화 8
G. Luciferase reporter assay 9
H. Bisulfite conversion과 pyrosequencing assay 9
I. Chromatin immunoprecipitation(ChIP) assay 12
Ⅲ. 결과 15
A. DNA 메틸화에 따른 TIM-3 발현 분석 15
B. TIM-3 발현에 차이가 있는 세포에서 TIM-3 유전자 DNA 메틸화 양상 분석 18
C. T 세포 활성에 의한 TIM-3 전사 증가와 그에 따른 TIM-3 DNA 메틸화 양상 23
D. TIM-3 promoter의 히스톤 메틸화 분석 27
Ⅳ. 고찰 29
Ⅴ. 결론 34
