목차

Ⅰ. 서 론 1
1.1 연구 배경 1
1.2 Ketoprofen이란 3
1.3 Esterase의 일반적인 특징 5
1.4 연구목적 7
Ⅱ. 실험재료 및 방법 8
2.1 실험 재료 8
2.1.1 시약 및 효소 8
2.1.2 사용균주 및 plasmid 9
2.1.3 배지 및 배양조건 11
2.2 실험 방법 12
2.2.1 Ketoprofen ethyl ester의 합성 12
2.2.2 Site-directed mutagenesis 12
2.2.3 재조합 esterase의 정제 13
2.2.4 SDS-PAGE 14
2.2.5 단백질 정량 14
2.2.6 p-nitrophenyl 유도체들에 대한 esterase 활성 측정 15
2.2.7 Ketoprofen ethyl ester에 대한 esterase 활성 측정 15
2.2.8 Enantioselectivity의 측정 18
2.2.9 효소의 최적 온도 및 열 안정성 20
2.2.10 효소의 최적 pH 20
2.2.11 유기용매의 영향 20
2.2.12 Kinetic parameter의 결정 21
Ⅲ. 결과 및 고찰 22
3.1 Site-directed mutagenesis 결과 22
3.2 재조합 esterase의 정제 24
3.3 p-nitrophenyl 유도체들에 대한 esterase의 활성 26
3.4 Ketoprofen ethyl ester에 대한 esterase의 활성 29
3.5 효소의 최적 온도 및 열 안정성 29
3.6 효소의 최적 pH 35
3.7 유기용매의 영향 39
3.8 Kinetic parameter의 결정 48
Ⅳ. 결 론 53
Ⅴ. 참고 문헌 55
Abstract 58