아주대학교

목차

ABSTRACT ••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• •i
TABLE OF CONTENTS •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• •••••••••••••iii
LIST OF FIGURES •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••vi
LIST OF TABLES ••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• ••••••••••••viii
I. INTRODUCTION•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••1
II. MATERALS AND METHODS
A. Construction of plasmids•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••5
B. Cell culture and transfection assay••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••5
C. Immunocytochemistry•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••6
D. Luciferase assay•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 6
E. Neural stem cells•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••7
F. Electrophoretic mobility super shift assay (EMSA) •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••7
G. Western analysis•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••8
H. Reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) ••••••••••••••••••••••••8
I. Neurite outgrowth assay••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••8
J. In situ hybridization••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••9
K. Bromodeoxyuridine (BrdU) Incorporation Assay•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••9
L. In utero electroporation and immunohistochemistry•••••••••••••••••••••••••••••••••••••10
M. Static analysis•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••10
N. Ubiquitination assay•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••11
III. RESULTS••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••12
PART I. Id proteins facilitate self renewal and proliferation of neural
stem cells•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 12
A. Id expression correlates with stemness of NSCs•••••••••••••••••••••••••••••••12
B. Id proteins promote self-renewal of NSCs••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••12
C. Inhibition of E-box mediated gene expression
by Id proteins•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••19
D. Overexpression Id proteins inhibit neuronal differentiation
in P19 cells and neurite-outgrowth in F11cells•••••••••••••••••••••••••••••••20
E. Id proteins are expressed in proliferating cells•••••••••••••••••••••••••••••••••25
F. Id proteins increase the proliferating neural precursors
in the developing brain•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••25
PART II. Posttranslational modification of NeuroD•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••32
A. NeuroD is a short-lived protein that is degraded
in the cell by the ubiquitin-proteasome-pathway••••••••••••••••••••••••••••••••32
B. NeuroD is degraded by the ubiquitin proteolytic
system in vitro•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••32

C. C-terminus of NeuroD is a critical site degraded by
the ubiquitin proteolytic system in vitro••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••33
D. Phosphorylation of NeuroD regulates its stability••••••••••••••••••••••••••••••••38
E. S266 and S274 site are important in NeuroD stability•••••••••••••••••••••••••38
IV. DISCUSSION •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 41
V. CONCLUSION•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••45
REFERENCES••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••46
국문요약•••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 55