BV-2 미세아교세포에서 PGE2 에 의한 LPS 유도 IFN-β생성 조절
초록/요약
미세아교세포 (microglia) 는 중추신경계 (CNS) 에 상주하는 면역세포로 외부의 자극에 의해 활성화되어 면역반응과 염증반응을 유발하는 것으로 알려져 있다. 면역 반응 시 생성이 증가되는IFN-β 는 항 바이러스성 물질로 잘 알려져 있으며 최근에는 다발성경화증 (multiple sclerosis) 과 같은 염증성질환의 치료제로 사용되고 있다. 일련의 보고에서 대표적인 proinflammatory mediator 로 잘 알려진 PGE2 가 IFN-β 의 생성을 억제하는 작용이 있는 것으로 보고된 바가 있지만 그 작용 기전에 대해서는 아직 정확히 밝혀진 바가 없다. 본 연구는 PGE2 에 의한 LPS 유도 IFN-β생성 조절기전을 규명하기 위한 연구의 일환으로 TLRs신호전달 과정 중 PGE2 의 표적인자를 확인 하고자 하였다. BV-2 에서 PGE2 는 LPS 또는 poly(I:C) 로 유도된 IFN-β 의 생성을 억제하는 작용을 보였다. IFN-β 의 발현은 IRF3 complex, AP-1, NF-кB 등의 enhanceosome 전사인자 복합체에 의해서 조절된다고 알려져 있으나, PGE2 는 MAPKs 와 그 하위 단계인AP-1의 활성화에 유의한 억제작용을 보이지 않았다. 또한 NF-κB 의 활성화 뿐만 아니라 IRF3의 활성화에서도 PGE2 의 억제 효과는 확인되지 않았다. 이 결과로 미루어보아 PGE2 에 의한 LPS유도 IFN-β 생성의 억제는 전사인자 활성화 단계에서 관여되지 않음을 알 수 있다.
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I. 서론 1
II. 재료 및 방법 5
A. 시약 및 실험 기기 5
B. 세포 배양 및 처리 6
C. Western blotting 6
D. Total RNA분리 및 RT-PCR (Reverse transcription-polymerase chain reaction) 7
E. Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA) 9
F. Transfection and luciferase assay 10
G. 통계처리 11
III. 결과 12
A. PGE2가 LPS 또는 poly(I:C) 에 의해 유도되는 IFN-β 생성에 미치는 영향 12
B. cAMP analog, Adenyly cyclase activator, EPAC activator, PKA activator 가 LPS 또는 poly(I:C) 에 의해 유도되는 IFN-β 생성에 미치는 영향 12
C. EP receptor agonists 가 LPS 또는 poly(I:C) 에 의해 유도되는 IFN-β 생성에 미치는 영향 16
D. MAPKs 또는 NF-κB inhibitors 가 LPS 또는 poly(I:C) 에 의해 유도되는 IFN-β 생성에 미치는 영향 16
E. PGE2 가 LPS 또는 poly(I:C) 에 의해 증가되는 MAPKs 인산화에 미치는 영향 20
F. PGE2가 LPS 또는 poly(I:C) 에 의해 증가되는 AP-1 DNA binding activity 에 미치는 영향 20
G. PGE2 가 LPS 또는 poly(I:C) 에 의해 증가되는 NF-κB 활성화에 미치는 영향 23
H. PGE2 가 LPS 에 의해 증가되는 IRF-3 인산화에 미치는 영향 25
IV. 고찰 27
V. 결론 33
