생분해성 고분자에서 연골세포의 접종과 배양방법의 비교
초록/요약
생체 조직 공학은 최근 급속도로 발전하고 있는데 학문인 이는 세포와 생분해성 고분자 지지체를 이용하여 생체의 기능을 대신할 수 있는 인공조직으로 재생하는 기술이다. 이러한 생체 조직 공학 기술을 인공 연골조직의 재생에 이용하기 위해서 는 먼저 연골조직의 일부를 채취하여 이 조직으로부터 연골세포를 분리해내고 필요. 로 하는 세포수를 획득할 때까지 상당 기간 배양한 후 생분해성 고분자에 부착시켜 서 일정한 배양환경 내에서 3차원 배양을 한다. 특히 이 과정 중에서 세포의 균일한 부착과 접종율은 생체조직공학 기술을 이용한 균일한 조직 형성에 있어서 매우 중요한 초기 과정이다. 또한 조직의 크기가 커지고 배양기간이 길어짐에 따라 고분자 지지체에 부착된 세포의 중식과 분비하는 세포외기질에 의해 감소되는 물질 전 달효율을 극복하기 위한 배양방법의 개발은 필수적인 요소이다. 따라서 본 연구에서는 정적 세포 접종 방법과 동적 세포 접종 방법을 이용하여 세 포를 접종한 후 그 부착 양상과 접종을을 비교하고 또한 배양환경에 따른 조직 생성 의 결과를 비교하기 위해 정적 배양 방법과 생체배양기를 이용한 동적 배양 방법으로 배양한 후 연골 조직이 생성되어 가는 과정을 살펴보았다. 접종시 세포의 부착양상과 배양시 조직 형성 과정을 보기 위해서 전자현미경(SEM) 촬영과 H&E 염색법을 사용하였고 배양된 조직에 S를 표지 시켜 세포외기질 내에 서의 단백당 (GAG) 합성율을 구하였고 Hoechst 33258과 spectrofluorometer를 이 용하여 핵산 (DNA)의 양을 측정하였다. 이와같은 실험결과 정적 세포 접종 방법 에 비해 동적 세포 접종 방법을 사용하였을 때에 접종율은 약 27% 정도 높았고 세 포의 부착양상도 더욱 균일한 형태를 나타내었다. 또한 3차원 배양시 생체 배양기를 사용한 동적 배양한 조직에서 단백당 합성율이 더 높게 나타났으며 전자현미경 (SEM) 촬영결과에서도 연골세포들이 잘 중식하고 세포외기질을 잘 분비하는 것을 발견할 수 있었다. 따라서 생체 조직 공학을 이용한 인공 연골 조직의 재생시 동적 세포 접종 방법에 의해 연골세포를 생분해성 고분자에 부착시킨 후 생체 배양기 내에서 동적 배양을 하는 것이 정적 세포 접종 방법과 정적 배양법에 의한 배양에 비해 유리한 것으로 사료된다.
more목차
1. 서론 1
2. 실험재료 및 방법 4
1) 실험동물 4
2) 관절 연골세포의 분리 및 배양 4
3) 고분자 중합체의 준비 4
4) 세포의 접종 5
5) 생체 배양기 (bioreactor) 7
6) 3차원적 배양 9
7) 검사 (assay) 9
3. 결과 12
1) 세포 접종 방법에 따른 결과 12
2) 배양 방법에 따른 결과 17
4. 고찰 27
5. 결론 30
참고문헌 31
영문 요약 36
