Naegleria fowleri의 분비-배설 단백질의 특성 분석
Characterizarion of Excretory-Secretory Proteins from Pathogenic Naegleria fowleri
- 주제(키워드) Naegleria fowleri , 병원성 , 분비-배설 단백질 , 항원성 , 2차원 전기영동법
- 주제(KDC) 570
- 주제(DDC) 660
- 발행기관 아주대학교 일반대학원
- 지도교수 신호준
- 발행년도 2007
- 학위수여년월 2007. 8
- 학위명 석사
- 학과 및 전공 일반대학원 분자과학기술학과
- 본문언어 영어
초록/요약
Identification of pathogen-related molecules of Naegleria fowleri is important to understand the pathogenesis of N. fowleri inducing primary amoebic meningoencephalitis (PAME). In this study, to investigate whether excretory-secretory proteins (ESPs) of N. fowleri are concerned with amoebic pathogenicity, N. fowleri ESPs was characterized. Cytotoxicity of ESPs on CHO target cells were increased by a dose- and time-dependent manner. Two proteolytic bands were detected in zymograph of ESPs of N. fowleri by GAGE. Anti-ESPs or infection sera were produced in BALB/c mice immunized or infected with whole ESPs or N. fowleri trophozoites, and then antigenic ESPs were detected by western blot analysis after SDS-PAGE and 2-DE. To identify antigenic of N. fowleri ESPs, specific ESPs bands reacted with an anti-ESPs or infection sera were analyzed by N-terminal sequencing. As the results, six candidate proteins, 58, 40, 24, 21, 18 and 16 kDa, which might be related with the antigenicity of N. fowleri, were indentified as secreted effector protein, secretory lipase, cathepsin B-like protease, cyteine protease, cathepsin B, peroxiredoxin, and thrombin receptor, respectively.
more초록/요약
병인(Pathogen)의 동정은 원발성 아메바성 수막뇌염을 일으키는 파울러자유아메바(Naegleria fowleri)의 병원성을 이해하는데 중요하다. 여러 연구에서 원충류로부터 분비배설된 다양한 단백질들이 병원성과 관련있다고 보고되어 있다. 파울러자유아메바의 분비배설단백질(excretory-secretory proteins, ESPs) 중 병원성과 관련된 요인을 찾고자 본 연구에서는 파울러자유아메바의 분비배설단백질의 구성 양상을 SDS-PAGE와 2차원 전기영동법 (2-dimensional electrophoresis)으로 분석하였다. BALB/c 마우스 복강에 파울러자유아메바의 분비배설단백질을 면역시켜 항-ESPs 항체를 얻었으며, 또한 파울러자유아메바의 영양형을 감염시켜 감염 혈청을 얻었다. 얻어진 항-ESPs 항체와 감염 혈청으로 SDS-PAGE와 2차원 전기영동 후 Western blot 분석법을 시행하여 분비배설단백질 중 항원성이 높은 단백질들을 찾을 수 있었다. 선별된 ESPs 단백질들은 유전자들을 동정하고자 N-terminal sequencing을 시행하였다. 그 결과, 58, 40, 24, 21, 18, 16 kDa의 단백질들을 동정하였으며, 각각 secreted effector protein, secretory lipase, cathepsin B-like protease, cysteine protease, cathepsin B, peroxiredoxin, thrombin receptor 등과 높은 상동성을 보였다. 동정된 각각의 단백질들의 역할들과 관련지어 볼 때, 파울러자유아메바의 분비-배설단백질들은 파울러자유아메바가 숙주세포에 침입하거나 숙주세포로부터 아메바를 보호하는데 관여하는 중요한 요인으로 작용할것이라 생각된다.
more목차
Ⅰ. INTRODUCTION = 1
Ⅱ. MATERIALS AND METHODS = 8
A. Cultivation of Neagleria fowleri = 8
B. Collection of ESPs = 8
C. Preperation Naegleria fowleri lysates = 8
D. Production of anti-ESPs and infection sera = 9
E. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis = 10
F. Gelatin acrylamide gel electrophoresis = 10
G. In vitro cytotoxicity = 11
H. 2-dimensional electrophoresis = 12
I. Western blot analysis = 13
J. N-terminal sequencing analysis and data searching = 14
Ⅲ. RESULT = 15
A. In vitro cytotoxicity of N. fowleri ESPs on CHO cells = 15
B. Proteolytic activity of N. fowleri ESPs = 16
C. SDS-PAGE patterns of N. fowleri ESPs and lysate = 17
D. Western blot analysis of N. fowleri ESPs = 18
E. Protein spots from N. fowleri ESPs post 2-dimensional electrophoresis = 19
F. Western blot analysis findings of N. fowleri ESPs = 20
G. N-terminal sequencing of antigen-related candidate proteins = 21
Ⅳ. DISCUSSION = 24
Ⅴ. CONCLUSION = 29
Ⅵ. REFERENCES = 30
국문요약 = 47
