Tim-3-Ig이 종양 성장에 미치는 영향
The Effect of Tim-3-Ig on Tumor Growth
- 주제(키워드) T cell immunoglobulin- and mucin domain-3 (Tim-3) , 종양 면역 , 당화 , 3LL , 역전사
- 주제(KDC) 513.994
- 주제(DDC) 616.994
- 발행기관 아주대학교 일반대학원
- 지도교수 박선
- 발행년도 2007
- 학위수여년월 2007. 2
- 학위명 석사
- 학과 및 전공 일반대학원 의학과
- 본문언어 한국어
초록/요약
Tim-3는 T 세포 immunoglobulin- and mucin-domain-containing molecules(TIMs)의 한 family로서 보조 T 세포 1형에서 특이적으로 발현하는 분자로 발견되었다. 이 분자는 그 ligand와 결합하여 Th1 세포의 면역반응을 억제하고 면역관용 유도에 관여한다고 알려져 있으나 종양면역에서 Tim-3의 역할에 대해서는 많이 연구된 바 없다. 본 연구에서는 Tim-3와 Tim-3 ligand 결합을 방해할 수 있는 Tim-3-Ig(Tim-3와 면역글로불린의 융합 단백질)이 종양 성장에 미치는 영향을 알아보고자 하였다. 본 연구에서 두 가지 연구 방법을 취하였다. 첫째, Tim-3-Ig을 발현하도록 만든 폐 종양 세포주 3LL의 종양 성장을 대조군 세포의 종양 성장과 비교하였다. 둘째, Tim-3-Ig을 생산 정제하여 3LL 종양 모델에 투여한 후 3LL의 종양 성장을 관찰하였다. 그 결과 3LL 세포의 Tim-3-Ig 발현 혹은 정제된 Tim-3-Ig의 투여에 의해 마우스 내 3LL 종양 성장이 억제되었다. 부수적으로 포유동물 세포와 곤충세포를 이용한 Tim-3-Ig의 생산법을 비교하여 Tim-3-Ig의 glycosylation이 Tim-3―Tim-3L 결합에 중요함을 관찰하였다. 본 연구 결과는 Tim-3-Ig이 종양성장에 억제작용을 할 수 있음을 밝힘으로써 종양면역에서 Tim-3―Tim-3L 경로의 중요성을 시사한다.
more초록/요약
Tim-3, a member of the novel TIM (T cell immunoglobulin- and mucin-containing-domain) family of molecules, is the first molecule identified to be specifically expressed on CD4+ Th1 and not on Th2 cells. Tim-3 negatively regulates Th1 immunity and induces tolerance, but it's function has not been clarified in tumor immunity. To explore the effect of Tim pathway blockade on tumor growth using Tim-3-Ig fusion protein, two approaches were adopted. First, it was investigated whether Tim-3-Ig expression in lung carcinoma cells (3LL) affects tumor growth in mice. Second, it was investigated whether administration of purified Tim-3-Ig into mice influences tumor growth. Tumor growth of 3LL cells expressing Tim-3-Ig was suppressed as compared with control mouse groups. Further tumor growth in mice injected with purified Tim-3-Ig was inhibited as compared with control mouse groups injected with human Ig and PBS, respectively. Additionally, Mammal I revealed the importance of Tim-3 glycosylation for its binding activity to Tim-3 ligand using Tim-3-Ig expressed by mammalian cells and by Sf 9 cells. My results showed suppressive effect of Tim-3-Ig on tumor growth, implying significance of Tim-3-Tim-3 ligand pathway in tumor immunology.
more목차
Ⅰ. 서론 = 1
A. Tim-3 = 1
B. Baculovirus를 이용한 단백질 발현 시스템 = 4
C. 종양과 Tim-3 = 4
D. 연구 목적 = 5
Ⅱ. 재료 및 방법 = 6
A. Tim-3-Ig 발현 벡터의 제조 = 6
B. Tim-3-Ig 발현 벡터의 이입 = 9
C. Western Blot Analysis = 10
D. 친화성 크로마토그래피와 고분자 액체 크로마토그래피 = 10
E. 마우스 CD4+ T 세포의 분리 = 11
F. 유세포 분석 = 12
G. 역전사 중합 효소 연쇄 반응 = 12
H. 재조합 baculovirus 생산과 곤충 세포 배양 = 13
I. 마우스에서 종양 성장 측정 = 14
Ⅲ. 결과 = 15
A. Tim-3 아미노산 서열 분석 = 15
B. Tim-3-Ig 발현 벡터 생산 = 16
C. 포유동물 세포에서 Tim-3-Ig의 생산·정제 및 리간드 결합능 분석 = 18
D. Tim-3-Ig을 발현하는 3LL 세포주 확립 = 21
E. 3LL 세포의 Tim-3-Ig 발현이 종양 성장에 미치는 영향 = 23
F. 곤충 세포에서 Tim-3-Ig의 생산과 정제 및 이의 리간드 결합능 분석 = 26
G. Tim-3-Ig의 투여가 종양의 성장에 미치는 영향 = 28
Ⅳ. 고찰 = 30
Ⅴ. 결론 = 33
참고문헌 = 34
ABSTRACT = 43
