항-DNA 자가항체의 세포독성과 DNA 절단 능력
Cytotoxicity and DNA cleaving activity of Anti-DNA Autoantibody
- 주제(키워드) 항-DNA 자가항체
- 발행기관 아주대학교
- 지도교수 장영주
- 발행년도 2006
- 학위수여년월 2006. 2
- 학위명 석사
- 학과 및 전공 일반대학원 의학과
- 본문언어 한국어
초록/요약
항-DNA 자가항체는 전신성 홍반성 낭창(SLE)의 유발에서 중요한 역할을 수행한다. 하지만 이러한 항체의 자가 면역질환에서의 잠재적인 표적물질과 병리학적인 역할은 아직 명확히 규명되어 있지 않다. 본 연구의 목적은 첫 번째로 항-DNA 자가항체의 DNA-절단 활성과 암세포와 정상세포에서의 세포독성을 분석하고 두 번째로 항체에 의한 세포사멸이 apoptosis를 통해 일어나는지 또한 어떠한 메카니즘이 관여하는지를 밝히고자 하는 것이다.
more목차
국문요약 ⅰ
차 례 ⅲ
그림차례 ⅴ
표 차례 ⅶ
Ⅰ. 서 론 1
Ⅱ. 재료 및 방법 3
A. 단클론 항-DNA 자가항체의 분리, 생산, 정제 및 확인 3
1. 세포배양 3
2. 단클론 항-DNA 자가항체의 생산 3
3. 항-DNA 자가항체의 정제 3
4. 정제된 항-DNA 자가항체 로부터의 Fab 생산 4
5. 정제된 G1-5 항체, Fab fragments의 SDS-PAGE 4
6. 항-DNA 자가항체의 DNA 결합 활성 측정을 위한 ELISA
(Enzyme-linked immunosorbent assay) 5
B. 암세포와 정상세포에 대한 항-DNA 자가항체의 세포독성 분석 5
C. 항-DNA 자가항체의 DNA 절단 활성 6
1. Plasmid cleavage (전기영동) 6
2. ALONA (affinity-linked oligonucleotide nuclease assay) 6
D. 항-DNA 자가항체로 유도되는 세포사멸의 메카니즘 분석 7
1. DNA fragmentation 7
2. Caspase 3의 활성 유무 관찰을 위한 Western blotting 8
3. 현미경 관찰 (phase-contrast microscope) 8
E. 항-DNA 자가항체의 세포 표면 결합과 세포질 혹은
핵의 localization 분석 9
1. 항체의 세포표면 결합 (FACS 분석) 9
2. 항체의 세포표면 결합 (형광현미경) 9
3. 항체의 세포질 혹은 핵의 localization (FACS 분석) 9
4. 항체의 세포질 혹은 핵의 localization (형광현미경) 10
Ⅲ. 결 과 11
A. 단클론 항-DNA 자가항체의 분리 정제 및 확인 11
B. 암세포와 정상세포에 대한 항-DNA 자가항체의 세포독성 분석 16
C. 항-DNA 자가항체의 DNA 절단 활성 20
D. 항-DNA 자가항체로 유도되는 세포사멸의 메카니즘 분석 25
E. 항-DNA 자가항체의 세포 표면 결합과 세포질 혹은
핵의 localization 분석 29
Ⅳ. 고 찰 36
Ⅴ. 결 론 38
참고 문헌 39
영문 요약 44
