한약재 열수 추출물에 의한 대식세포의 Nitric Oxide 생산 및 염증관련 활성에 미치는 영향
Effect of aqueous extracts from medicinal plants on nitric oxide production and inflammatry activities of macrophage
- 발행기관 亞洲大學校 大學院
- 지도교수 南碩鉉
- 발행년도 2005
- 학위수여년월 2005. 2
- 학위명 석사
- 학과 및 전공 일반대학원 생영과학과
- 본문언어 한국어
초록/요약
천연물 시료에서 분리된 catechin 성분이나 polyphenol계 물질들이 nitric oxide의 생산에 영향을 주어 염증 반응을 조절하는 효과가 있다고 알려져 있다. 본 실험에서는 mouse macrophage cell line인 RAW264.7 세포주를 이용하여 한의학에서 항염증 효과가 입증된 40종의 한약재의 nitric oxide 억제효과 여부를 측정하였다. 실험결과, griess reaction을 이용한 nitric oxide의 측정에서 8종의 한약재가 어느 정도 억제효과가 있음을 볼 수 있었다. 또한 또 다른 염증반응의 지표로서 MMP-9(Matrix Metallo Protein-9)의 활성을 측정하였고, 8종의 한약재에서 어느 정도 동일한 결과를 얻을 수 있었다. 위의 두 가지 실험을 통해 선별된 8종의 한약재가 직접적인 nitric oxide의 생성에 관여하는지를 알아보기 위하여 western blotting을 이용하여 nitric oxide synthase의 활성을 측정하였고, 염증에 관여하는 cytokine인 IL-1β, TNF-α, IL-6의 전사단계 조절에서의 역할을 알아보기 위하여 RT-PCR을 수행하였다. 또한 또 다른 염증반응의 매개물질인 COX-2에 대해서도 동일한 RT-PCR을 수행하여 확인하였다. 위의 실험들을 통해 8종의 한약재가 nitric oxide의 억제를 통한 항염증반응에 관여함을 확인 할 수 있었고, MMP-9과 COX-2와 같은 또 다른 염증 매개물질에도 관여함을 확인 할 수 있었다. 이상의 실험으로부터 한약재 추출물의 항염증 효과를 확인 할 수 있었고, 이러한 결과는 수많은 천연물 시료에서의 항염증 물질의 발견에 중요한 기준으로 이용될 수 있을 것으로 생각된다.
more초록/요약
It is known that catechin and polyphenol in natural plants extracts take effect on nitric oxide production step, control inflammatry activity. In this study, the effect of aqueous extracts from forty medicinal plants on nitric oxide inhibition were studied in cultured RAW264.7 cells. In result, eight extracts show nitric oxide inhibition effect. Also MMP-9(Matrix Matallo Protein-9), other index of inflammation, is shown same result. Next step, nitric oxide synthase expression made using western blotting and effect of the medicinal plants on inflammatry cytokines transcription step such as IL-1β, TNF-α, IL-6 and other inflammatry index, COX-2 were studied RT-PCR. This results show the medicinal plants have inhibitory effect on inflammation therefore this results will be contributed selection of natural plants extracts and discovery anti-inflammatory material such as catechin and polyphenol.
more목차
목차
국문요약 = ⅰ
감사의글 = ⅱ
목차 = ⅲ
List of Figure = ⅴ
List of Table = ⅵ
Ⅰ. 서론 = 1
Ⅱ. 재료 및 방법 = 6
1. 시료 및 시약 = 6
2. Nitrite determination = 10
3. Cell viability 측정 10
4. Zymorgraphy를 이용한 MMP-9의 활성 측정 = 11
5. SDS-PAGE and Western blot analysis = 11
6. RT-PCR을 통한 Cytokines의 전사단계에서의 발현 조절 측정 = 12
Ⅲ. 결과 및 고찰 = 13
1. Nitric oxide 소거능 측정을 위한 조건 확립 = 13
2. 한약재 농도에 따른 세포 독성 측정 및 Nitric oxide 소거능 측정 = 14
3. 한약재에 따른 MMP-9의 발현 조절 측정 = 18
4. Western blotting을 이용한 iNOS expression 측정 = 21
5. RT-PCR을 이용한 염증성 cytokines의 측정 = 23
5-1. 8종의 한약재 열수 추출물에 의한 iNOS 전사단계에서의 영향 = 23
5-2. 8종의 한약재 열수 추출물에 의한 IL-1β 전사단계에서의 영향 = 24
5-3. 8종의 한약재 열수 추출물에 의한 TNF-α 전사단계에서의 영향 = 25
5-4. 8종의 한약재 열수 추출물에 의한 IL-6 전사단계에서의 영향 = 26
5-5. 8종의 한약재 열수 추출물에 의한 COX-2 전사단계에서의 영향 = 27
Ⅳ. 결론 = 28
Ⅵ. 참고문헌 = 30
Abstract = 33
