후코이단 함유 나노섬유에서 3 차원 배양한 면역세포의 활성
Activity of immune cells cultured in the threedimensional environment based on a fucoidancontaining nanofiber
초록/요약
후코이단은 갈조류에서 정제된 황산화 다당류이며 항원 흡수 촉진, 항염증, 항바이러스 및 항종양 효과 등 다양한 면역 조절 효과에 대해 연구되고 있다. 본 연구는 체내 유사 환경인 3차원 나노섬유에서 후코이단에 대한 면역세포의 활성과 활성화된 면역세포에서 분비되는 사이토카인을 알아보고, 3차원 환경과 2차원 환경에서 배양된 면역세포의 차이를 비교하는 것을 목표로 한다. 2차원 환경에서 배양된 세포는 생체 내 환경과 약간의 차이가 있는데 이를 보완하기 위해 체내 환경과 비슷한 3차원 환경의 나노섬유 지지체가 개발되고 있다. 그 중 생체 적합성과 생분해성 등 우수한 특성과 다양한 용도로 활용되고 있는 합성 고분자 polyvinyl alcohol (PVA)을 이용한다. 3차원 환경의 나노섬유를 제작하기 위해 전기방사(electrospinning)를 이용하고 갈조류 Fucus vesiculosus 에서 정제된 후코이단 (Fucoidan)을 사용하여 후코이단을 함유한 polyvinyl alcohol (PVA) 나노섬유를 제작한다(이하 Fucoidan-PVA). 후코이단을 농도별로 처리하여 면역세포의 활성도를 측정한 후, 후코이단의 적정 처리 농도를 결정한다. 나노섬유에서 후코이단을 통한 면역세포의 활성을 알아보기 위하여 Fucoidan-PVA 나노섬유에서 세포를 배양하고 세포의 활성도를 바탕으로 세포의 배양일을 결정한다. 그 후 Fucoidan-PVA 나노섬유에서 배양된 면역세포에서 분비되는 사이토카인을 측정한다. Fucoidan-PVA 나노섬유에서 후코이단은 면역세포의 CD86 발현을 유도하여 활성화시키고 TNF-α, IL-6, IL-1β 사이토카인을 분비시킨다. 이를 바탕으로 3차원 나노섬유에서 배양된 면역세포의 활성은 후코이단에 대한 효과 연구에 활용될 수 있다.
more목차
Ⅰ 서론 1
Ⅱ 실험 재료 및 방법 3
A. 실험 재료 3
B. PVA 나노섬유와 Fucoidan-PVA 나노섬유의 제조방법 및 전기방사 3
C. Fucoidan-PVA 나노섬유 염색 방법 4
D. Raw264.7세포 배양 방법 4
E. 대식세포 채취 5
F. 골수에서 수지상세포 채취 5
G. 나노섬유에서 수지상세포 배양 방법 6
H. 유세포 분석 (Flow Cytometry) 6
I. 세포 면역 화학 염색법 (Immunocytochemistry) 6
J. 주사 전자 현미경 (Scanning Electron Microscope, SEM) 7
K. 공초점 레이저 현미경 (Confocal laser microscopy) 7
L. 효소 결합 면역 흡착 검사 (Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) 8
M. 통계 분석 (Statistical analysis) 8
Ⅲ 결과 9
A. 마우스 면역세포에 다양한 Fucoidan 농도의 처리 9
B. Fucoidan-PVA 나노섬유의 형태 12
C. Fucoidan-PVA 나노섬유에서 수지상세포 관찰 15
D. 3차원 배양한 수지상세포의 활성 18
E. 3차원 배양한 수지상세포 배양액의 사이토카인 측정 23
Ⅳ 고찰 26
Ⅴ 결론 28
참고문헌 29
