프로테옴 분석에 의한 멜라닌 형성억제 메커니즘 분석방법 연구
Studies on methods for analysis of melanogenesis of B16 melanocyte by proteome analysis
- 주제(키워드) proteomics , melanin , 프로테옴 분석 , 멜라닌 , B16
- 주제(KDC) 570
- 주제(DDC) 660
- 발행기관 아주대학교 일반대학원
- 지도교수 변상요
- 발행년도 2007
- 학위수여년월 2007. 2
- 학위명 석사
- 학과 및 전공 일반대학원 분자과학기술학과
- 본문언어 한국어
초록/요약
본 연구에서는 미백에 효과적인 물질들이 어떠한 기작에 의해 melanin 형성을 저해하는 지에 대하여 알아보는 방법으로 2-DE를 사용하고자 하였다. 먼저 돌외 에탄올 추출물을 얻은 후 세포 독성 시험과 melanin 함량 측정을 통하여 미백에 효과가 있는지 알아보았다. 그 후 돌외 추출물을 처리한 melanocyte와 처리하지 않은 melanocyte의 전체 proteome을 2-DE를 사용하여 비교한 후 분석하였다. 그 결과 spot volume이 2배 이상 차이가 나는 spot들 을 여러 melanin 형성 관련 protein들과 matching할 수 있었고, 돌외의 melanin 형성 기작을 추론하여 볼 수 있었다. 이러한 2-DE를 이용한 미백 기작 연구방법을 바탕으로 melanin 형성 억제 능력이 아주 뛰어난 것으로 알려진 산뽕나무 심재 추출물의 기작을 연구하였다. 먼저 산뽕나무의 에탄올 추출물을 얻은 후 melanocyte에 처리하여 처리하지 않은 melanocyte와 proteome을 비교하였다. Gel image 분석 후 melanin 형성 관련 protein들과 matching 되는 spot을 선정하여 MALDI-TOF를 통해 mass 분석을 하였다. 그 결과 melanogenesis 와 관련 있는 protein들을 동정 할 수 있었고, 이런 protein들의 melanin 형성에 대해 알려져 있는 역할들을 토대로 산뽕나무 심재가 어떠한 기작에 의해 미백효능을 나타내는지 추론하여 볼 수 있었다.
more초록/요약
The inhibitory mechanism of melanogenesis by Gynostemma pentaphyllum was analyzed using two-dimensional electrophoresis (2-DE). The extract of Gynostemma pentaphyllum was tested to control the melanogenesis in B16 melanoma. Cytotoxic effect by the extract was observed when the dose concentration was higher than 2 mg/L. Most of the inhibitory effect was obtained by the reduced accumulation of extra-cellular melanin. When the extract was dosed as 2 mg/L, the extra-cellular melanin produced was only 24% of the control. Proteome analysis with 2-D PAGE showed that various proteins involved in melanogenesis were down-regulated by Gynostemma pentaphyllum. In addition to other proteins related to the intra-cellular melanogenesis, Rab-27b and Rab-38 could explain the remarkable decrease in extra-cellular melanin accumulation by reduced melanin transfer to keratinocyte.
more목차
1. 서론 = 1
가. Melanocyte = 1
나. Melanin 형성 과정 = 1
다 .돌외와 산뽕나무 = 4
라 .Proteome 분석 기술 = 7
마. 본 연구의 목적 7 =
2. 실험재료 및 방법 = 9
가. 시료 준비 = 9
나 .추출물을 함유한 melanocyte의 배양 = 9
다. Cell viability assay (MTT assay) = 9
라. Melanin content test = 10
마. Protein extraction = 10
바. Two-dimensional electrophoresis = 10
사. In-gel digestion = 11
아. Mass spectrometry = 11
3. 결과 및 고찰 = 13
가. 돌외 = 13
(1) Cell viability assay = 13
(2) Melanin content = 13
(3) Proteome analysis = 16
(4) Inhibitory mechanism = 20
나. 산뽕나무 = 21
(1) Proteome analysis = 21
(2) Inhibitory mechanism = 33
4. 결론 = 36
5. 참고문헌 = 37
Abstract = 40
