Rbies virus G-protein을 이용한 유전자 재조합 백신의 개발
Development of recombinant vaccine using rabies virus G-protein
- 주제(키워드) rabiesvirus+G-protein+adenovirus+recombinantvirus , 유전자 재조합 백신 , 백신 , virus G-protein , recombinant vaccine
- 주제(KDC) 475.54
- 주제(DDC) 579.2
- 발행기관 아주대학교 일반대학원
- 지도교수 남석현
- 발행년도 2007
- 학위수여년월 2007. 2
- 학위명 석사
- 학과 및 전공 일반대학원 생명과학과
- 본문언어 한국어
초록/요약
본 연구는 광견병바이러스(Rabies virus, ERA strain)의 G-protein 유전자를 이용하여 adenovirus vector에 유전자를 도입함으로서 개 광견병 예방백신으로서의 가능성을 확인하고자 했다. 광견병 바이러스 ERA주를 돼지 신장세포(porcine kidney cell)를 초대 배양한 세포에서 증식시켜 total RNA를 추출한 후 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA로 G-protein 전체유전자를 증폭할 수 있는 primer를 제작하여 Polymerase Chain Reaction(PCR)통해 얻고자 하는 유전자인 1,570bp크기의 G-protein 유전자를 얻을 수 있었다. 얻어진 G-protein 유전자를 적당한 제한 효소로 절단된 adenovirus cosmid vector에 유전자 재조합하였으며, adenovirus genome DNA-TPC와 함께 293-cell 내로 유전자를 도입하였다. 성공적으로 재조합된 adenovirus를 RT-PCR과 Western blot analysis를 통하여 발현 유무를 확인하고 이렇게 만들어진 재조합 adenovirus를 AdenoERA-gp recombinant virus라 명하였다. 이번 연구를 통해서 만들어진 AdenoERA-gp recombinant virus는 광견병 예방 백신으로서의 가능성과 나아가 광견병 바이러스의 유전학적인 연구에서도 유용하게 사용 될 것으로 기대된다.
more초록/요약
This research was carried out to know the possibility of recombinant Rabies vaccine which had been introduced G-protein gene of rabies virus into adenovirus. The total RNA was extracted from the Rabies virus, ERA strain which had been cultivated at primary porcine kidney cell, and cDNA was synthesized. The primers for amplifying the whole G-protein were prepared and got the 1,570bp G-protein gene from PCR. The obtained G-protein was cut with restriction endonuclease, and inserted to adenovirus cosmid vector. This vector again inserted recombinant adenovirus cosmid vector with adenovirus genome DNA-TPC gene into 293 cells. The target protein was proven by RT-PCR, and western blot analysis, and named as AdenoERA-gp Recombinant virus. Conclusively, this AdenoERA-gp Recombinant virus may be effective as the recombinant rabies vaccine, and helpful to study for genetic research of rabies virus.
more목차
Ⅰ. 서론 = 1
Ⅱ. 재료 및 방법 = 9
1. 실험 재료 = 9
1-1. 세포 및 바이러스 = 9
1-2. Cosmid = 9
1-3. Primer = 9
1-4. 사용 배지 및 시약 = 10
2. 실험 방법 = 11
2-1. 돼지 신장세포의 초대 배양 = 11
2-2. 광견병 바이러스의 접종 및 배양 = 11
2-3. 293-Cell 및 HeLa의 배양 = 12
2-4. Total RNA 추출 및 cDNA 합성 = 12
2-5. PCR산물의 증폭과 Agarose gel에서 추출 = 13
2-6. 유전자 클로닝과 형질 전환 = 13
2-7. 재조합 cosmid의 분리 및 선별 = 14
(1) 재조합 cosmid의 분리 = 14
(2) 재조합된 cosmid의 선별 = 15
2-8. 293-cell에 유전자 도입 및 발현의 확인 = 16
(1) 293-Cell로의 유전자 도입 = 16
(2) 재조합된 유전자의 RT-PCR = 17
(3). Western blot analysis = 18
Ⅲ. 실험결과 = 22
1. Rabies virus(RV) G-protein유전자의 cDNA 작성 = 22
2. viral vector의 재조합 = 22
3. virus propagation = 23
4. RT-PCR = 24
5. Western blot analysis를 통한 rabies virus G-protein의 단백질생산의 확인 = 24
Ⅳ. 고찰 = 31
참고 문헌 = 33
Abstract = 37
